Conservación de cepas vacunales de Leptospira en nitrógeno líquido / Preservation for vaccinal strains of Leptospira at liquid nitrogen

INTRODUCCIÓN: las cepas de Leptospira interrogans que integran la vacuna cubana vax-SPIRAL® son conservadas en medio semisólido de Fletcher, el cual garantiza el mantenimiento de la viabilidad de las células por pocos meses. OBJETIVO: en este estudio, se evaluó la crioconservación en nitrógeno líquido de 6 variantes de crioprotectores como método de conservación a largo plazo de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRAL®. MÉTODOS: la viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación, frente a una batería de antisueros de referencia correspondientes a los serogrupos vacunales. RESULTADOS: solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 por ciento, y glicerol 2,5 por ciento como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas, tras 19 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación en nitrógeno líquido con un apropiado agente crioprotector, como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.

INTRODUCTION: Leptospira interrogans strains of Cuban vaccine vax-SPIRAL®are preserved in Fletcher's semi-solid medium, which guarantees the preservation of the cell viability for a few months. OBJECTIVE: to evaluate the cryopreservation at liquid nitrogen of 6 different cryoprotectors as a long-term preservation method for Leptospira interrogans strains used as antigens in vaccine vax-SPIRAL® against leptospirosis. METHODS: viability was systematically evaluated according to the cell yield of the recently thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera from vaccinal serogroups. RESULTS: the use of 2.5 percent and 5 percent dimethyl sulfoxide, and 2.5 percent glycerol allowed quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletion after 19 months of cryopreservation. CONCLUSIONS: the results showed the feasibility of the cryopreservation at liquid nitrogen using suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccinal strains of Leptospira.

Conservación de cepas vacunales de Leptospira a -70 ºC / Preservation of vaccine strains of Leptospira at - 70 °C

Se evaluó la crioconservación a - 70 ºC con 9 variantes de crioprotectores como método de conservación de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRALâ. La viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación frente a antisueros de referencia. Solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 % o leche descremada 5 % como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas tras 7 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad, mientras el glicerol tuvo un efecto variable sobre el grado de recuperación de las cepas evaluadas. Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación a - 70 ºC con un apropiado agente crioprotector como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.

The goal of this study was to evaluate the cryopreservation at -70ºC with the use of 9 different cryoprotectants as a preservation method for the strains of Leptospira interrogans used as antigens in the leptospiral vaccine vax-SPIRALâ. Viability was systematically evaluated according to the cell yield achieved by the just thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in Hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera before and after cryopreservation. Only the use of 2,5% and 5% dimethyl sulfoxide or 5% skim milk allowed a quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletions after 7 months of cryopreservation while glycerol had a variable effect on the degree of recovery of each strain. The results showed the feasibility of the cryopreservation at -70 °C with the use of a suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccine strains of Leptospira.